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相關文章肝素親和柱 Heparin凈化柱貨號:B2804規格:3ml*10支/套本產品僅供科研實驗用,不做其它用途!
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肝素親和柱 Heparin凈化柱
貨號:B2804
規格:3ml*10支/套
1. 產品介紹
乳鐵蛋白是近年來國內外開發研究速度最快的一種營養添加劑,由于其具有廣譜抗菌、抗病毒感染、調節體內鐵平衡、調解骨髓細胞的生成、抑制人體腫瘤細胞、同多種抗生素及抗真菌制劑協同有效治療疾病等功效,使其產品在國內外乳制品加工中的應用范圍日益廣泛。
肝素親和柱能夠特異性的純化樣品中的乳鐵蛋白,本產品采用了柱狀瓊脂糖凝膠作為固相載體,瓊脂糖凝膠與肝素偶聯形成免疫吸附劑,裝柱制成免疫親和柱,能夠特異性的純化樣品中的乳鐵蛋白,樣品前處理后,通過免疫親和柱凈化,乳鐵蛋白特異性吸附在親和柱上,用淋洗液將免疫親合柱上的雜質除去,用洗脫液通過分離柱,將乳鐵蛋白親和柱上分離下來,最后,將洗脫液注入HPLC或LC-MS進行測定。
2. 用途
適用于乳、乳粉等食品中乳鐵蛋白含量測定;樣品中乳鐵蛋白的凈化,提取等。操作流程
結合緩沖液:50 mM磷酸鹽緩沖液、pH8.0左右
洗脫緩沖液:50 mM磷酸鹽緩沖液,2 M NaCl,pH8.0 左右
(1)樣品處理:
(注:適當調節樣品稱取量,使樣品中乳鐵蛋白含量應控制在3mg以內。)
①乳粉:精確稱取 2g樣品,置于玻璃燒杯中,加入已預熱至40 ℃左右(不可超過50℃)的結合緩沖液35 mL ,用玻璃棒攪拌使其溶解均勻。將其轉移至50 mL 容量瓶中,用少量的結合緩沖液分次洗滌燒杯和玻璃棒,洗滌液一并移入容量瓶中,用結合緩沖液定容至50ml,混勻,倒入50 mL離心管中,在4℃條件下離心(5000r、10min,棄掉上層油脂,底層沉淀,取中間層)或微纖維過濾方式去除油脂和雜質,準確吸取10 mL作為樣品液。
②奶液:稱取適量樣品(以不超過3mg乳鐵蛋白載量為原則,例如:普通牛奶中乳鐵蛋白參考含量小于0.5mg/g,建議稱量10-20g、牛初乳中乳鐵蛋白參考含量1-2mg/g,建議稱量2-5g),置于50mL容量瓶中,用結合緩沖液定容至50ml,混勻,倒入50 mL離心管中,在4℃條件下離心(5000r、10min,棄掉上層油脂,底層沉淀,取中間層)或微纖維過濾方式去除油脂和雜質,準確吸取10 mL作為樣品液。
(2)柱子預處理:取出肝素親和柱,恢復至室溫(22-25℃),將上端塞子取出,打開下端堵頭,將柱內保存液流掉至高于凝膠上界面3-5mm處,加入總體積10ml的結合緩沖液平衡柱子(柱子不要走干)。
(3)加樣:加入處理好的樣品10ml,以流速為1-2滴/秒上樣,直至樣品全部通過親和柱至凝膠上界面(柱子不要走干)。
(4)淋洗:加入10mL結合緩沖液淋洗柱子,除去雜質,適當給一些壓力,調節流速為1-2滴/秒,直至樣品全部通過肝素親和柱,并排干。
(5)洗脫:加入4ml洗脫緩沖液,調節流速為1-2秒每滴,緩慢洗脫并排干,收集全部洗脫液,以洗脫緩沖液定容至4ml,即為凈化后樣品。
(6)檢測:凈化后樣品用質譜,高效液相、熒光等方法進行檢測。
肝素親和柱 Heparin凈化柱