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Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF

Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF
英文名稱:Strep-Tactin Berpharose FF
?貨號:B2778
規格:1套
本產品僅供科研實驗用,不做其它用途!

  • 產品型號:
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2024-10-28
  • 訪  問  量:394
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詳細介紹

Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF


英文名稱:Strep-Tactin Berpharose FF


貨號:B2778


1.      產品介紹


Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF是一種將Strep-Tactin鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的生物親和層析分離介質,主要用于純化Strep II標簽蛋白。Strep II標簽為8個氨基酸的小標簽(WSHPQFEK),由于標簽小,僅為1kDa左右,一般不影響融合后蛋白質的結構和功能,常用于融合表達蛋白質的檢測和純化。


本產品的配基Strep-Tactin是鏈霉親和素(Streptavidin)的突變體,與鏈霉親和素相比,Strep-Tactin對Strep II標簽的親和能力至少強10倍以上,能夠在溫和的條件下與Strep II融合蛋白結合和解離。由于Strep-Tacin對Strep II標簽具有高度特異性,一般一步純化就能獲得高純度的蛋白質樣品。


Strep II標簽蛋白與凝膠結合后可使用脫硫生物-素競爭方式進行洗脫,該洗脫方式比較溫和,一般不會影響蛋白質的性質。如蛋白質能耐受一定的堿,也可用堿液洗脫,比如10mM NaOH等。


2.規格


1ml(預裝柱)、5ml(預裝柱)、10ml(預裝柱)、20ml、100ml、500ml  純化流程


①推薦緩沖液


純化Strep II標簽蛋白


結合緩沖液:100mM Tris-HCl,150mM NaCl,1mM EDTA,pH8.0;


或20mM NaH2PO4,280mM NaCl,6mM KCl,pH7.4


洗脫緩沖液:結合緩沖液+ 2.5mM脫硫生物-素;


或10mM NaOH


再生緩沖液:0.5M NaOH;


或結合緩沖液+1mM HABA


②樣品準備


上柱的樣品應盡量保持與結合緩沖液一致。通常可用透析、超濾、稀釋等方法處


理樣品。并且上柱前應過0.45μm濾膜或高速離心去除不溶物。


③樣品純化


(1)平衡:取適量的Strep-Tactin Berpharose FF裝入合適的層析柱中,用蒸餾


水清洗5個柱體積去除保存液,再用結合緩沖液平衡5個柱體積,建議流速為100cm/h。


(2)上樣:將準備好的樣品上柱,建議流速為20-100cm/h,可根據實際結合情


況選擇流速,能獲得較好的效果。


(3)再平衡:上樣后用結合緩沖液平衡10個柱體積以上,或平衡至基線,洗去


雜質,推薦流速為100cm/h。


(4)洗脫:用洗脫緩沖液洗10-20個柱體積,建議流速為100cm/h,收集的洗脫


液應立即調節pH至穩定范圍,并根據需要置換緩沖液。


(5)NaOH再生:洗脫目的蛋白后的柱子用蒸餾水清洗3-5個柱體積,并用0.5M


NaOH再生3-5個柱體積,再用蒸餾水清洗至中性,用20%乙醇保存柱子,或進行下


一次純化。


(6)HABA再生:用脫硫生物-素洗脫目的蛋白的,還可以用HABA緩沖液再生,


一般用HABA的結合緩沖液洗15個柱體積,再用結合緩沖液洗30個柱體積,然后可


以用20%乙醇保存柱子,或進行下一步純化。HABA上柱后凝膠顏色會變為紅橙色,


在結合緩沖液平衡后會恢復正常的白色,這種再生方式一般使用體積會大些。


 5.注意事項:


1)使用時保證柱子和緩沖液的溫度一致,避免柱床內產生氣泡,影響純化效果。


2)本產品保存條件為20%乙醇,4~8℃。


3) 2-25℃,常壓,避光運輸


4)僅供科研實驗使用



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