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相關文章蛋白G瓊脂糖凝膠英文名稱:Protein G Berpharose FF貨號:B2777規格:1套本產品僅供科研實驗用,不做其它用途!
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蛋白G瓊脂糖凝膠
英文名稱:Protein G Berpharose FF
1.產品介紹
鏈球菌G蛋白(Streptococcus Protein G,SPG)是G、C型鏈球菌細胞壁中的一種蛋白質,能特異性地同免疫球蛋白IgG分子的Fc段結合而不影響其Fab段與抗原分子結合的能力,其親和填料可以用于從血清、腹水、組織培養物等上清中結合吸附并純化免疫球蛋白(抗體)。
2.規格
1ml(預裝柱)、5ml(預裝柱)、10ml(預裝柱)、25ml、100ml、500ml、1L純化流程
應用舉例:
結合緩沖液:20mM磷酸緩沖液、150mMNaCl、pH7.0
洗脫緩沖液:0.1M甘-氨酸,PH3.0或0.1M檸檬酸緩沖液,pH 4.0
中和緩沖液:1 M Tris-HCl,pH 8.5
1) 1ml重組蛋白G瓊脂糖凝膠預填柱,用5-10個柱床體積的蒸餾水洗去保存液。
2)用結合緩沖液平衡5-10個柱床體積。
3)將5ml人多抗血清用結合緩沖液稀釋至50ml,0.45μm濾膜過濾上樣。
4)用結合緩沖液平衡5-10個柱床體積至基線。
5)用洗脫緩沖液洗脫抗體,收集洗脫峰,并用中和緩沖液調節其pH至中性。
6)每次使用后依次使用3個柱體積的結合緩沖液,5個柱體積的去離子水,5個柱體積的20%的乙醇平衡保存,防止填料被細菌污染。
7) SDS-PAGE電泳分析。
6.注意事項:
1)樣品洗脫后一般pH很低,應立刻用堿性中和緩沖液(如1MTris-HCl,pH8.5)將收集到的抗體溶液中和到中性,或在收集容器中事先裝5-10%、pH7.5的緩沖液(如1MTris-HCl或1M磷酸緩沖液),以利于維持抗體的生物活性,避免抗體失活。
2)使用時保證柱子和緩沖液的溫度一致,避免柱床內產生氣泡,影響純化效果。
3)填料再生清洗:隨著一些變性物質的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和結合載量下降,嚴重影響純化效果,這時需要對填料進行再生清洗(如下步驟)
去除沉淀或變性物質:用2倍柱體積的6M鹽酸胍溶液進行清洗,然后立即用5倍柱體積的PBS, pH 7.4清洗。
去除疏水性吸附造成的非特異性吸附物質:用3-4倍柱體積的70%乙醇或2倍柱體積的1% Triton™X-100清洗,然后然后立即用5倍柱體積的PBS, pH 7.4清洗
4)本產品保存條件:20%乙醇,4~8℃。