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TTC染色實驗代測

TTC染色實驗代測
TTC(2,3,5—氯化三苯基四氮唑)是脂溶性光敏感復(fù)合物,1894年*合成用來檢測種子的生存能力,1958年開始用來染色檢測哺乳動物組織的缺血梗塞。它是呼吸鏈中吡啶—核苷結(jié)構(gòu)酶系統(tǒng)的質(zhì)子受體,與正常組織中的脫氫酶反應(yīng)而呈紅色,而缺血組織內(nèi)脫氫酶活性下降,不能反應(yīng),故不會產(chǎn)生變化呈蒼白
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  • 更新時間:2024-10-26
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TTC染色實驗代測

TTC染色實驗介紹:

TTC(2,3,5—氯化三苯基四氮唑)是脂溶性光敏感復(fù)合物,1894年*合成用來檢測種子的生存能力,1958年開始用來染色檢測哺乳動物組織的缺血梗塞。它是呼吸鏈中吡啶—核苷結(jié)構(gòu)酶系統(tǒng)的質(zhì)子受體,與正常組織中的脫氫酶反應(yīng)而呈紅色,而缺血組織內(nèi)脫氫酶活性下降,不能反應(yīng),故不會產(chǎn)生變化呈蒼白

 

TTC染色實驗步驟(僅供參考):

1、動物麻醉后立即取材,冷凍PBS從左心室灌注,整個灌注5分鐘內(nèi)必須完成;

2、入-20℃冰箱中速凍20-30min,便于切片;

3、用手術(shù)-刀片或是刮胡刀片切片,厚度2-3mm為宜;

4、將切片置于TTC孵育液中,放入37℃溫箱(不得高于40℃)或是水浴鍋中避光孵育15-30min,隨時觀察,間隔數(shù)分鐘翻動組織,使其均勻接觸到染色液;

5、組織成色后,加入固定液終止反應(yīng)及保存組織,24h后拍照。

染色結(jié)果:正常組織呈紅色,梗死區(qū)呈蒼白色。

注意事項:

1、標(biāo)本越新鮮越好,動物麻醉后取材需迅速,勿固定,刀片宜薄而鋒利,在冰箱中速凍的時間以能順利切片為宜,保持切片平整;

2、孵育液提前30min入37℃中水浴或是溫箱中加溫;

3、染色后的標(biāo)本浸存于10%中性甲醛或是4%多聚甲醛中,染色結(jié)果能保存數(shù)月,在陽光下易褪色;

4、TTC染色液避光4℃可保存數(shù)月,可重復(fù)利用2-3次。


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