大鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶 (ACE)ELISA試劑盒 |
產(chǎn)品中文: | 大鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶 (ACE)ELISA試劑盒 |
產(chǎn)品英文: | Mouse ACE (Angiotensin I Converting Enzyme) ELISA Kit |
產(chǎn)品規(guī)格: | 48T/96T |
所需實(shí)驗(yàn)儀器: | 酶標(biāo)儀,洗板機(jī),離心機(jī) |
保存條件: | 2-8度 |
有效期: | 6個(gè)月 |
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試劑盒組成: | | | | | | |
試劑盒組成 | 48T | 96T | 保存 | |
說(shuō)明書(shū) | 1份 | 1份 | | |
封板膜 | 2片(48) | 2片(96) | | |
密封袋 | 1個(gè) | 1個(gè) | | |
酶標(biāo)包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 | |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 | |
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 | |
酶標(biāo)試劑 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 | |
樣品稀釋液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 | |
顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 | |
顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 | |
終止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 | |
濃縮洗滌液 | (20倍)20ml×1瓶 | (30倍)20ml×1瓶 | 2-8℃保存 | |
注:標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液依次做倍比稀釋 |
標(biāo)本要求: | | | | | | |
在收集樣本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃,必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)的樣本,及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?。?duì)于隔天再檢測(cè)的樣本,及時(shí)分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆?,有條件的,-70℃凍存?zhèn)溆谩?biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。 |
液體類(lèi)標(biāo)本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。 |
1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。 |
2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。 |
3.尿液:用無(wú)菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參。 照此實(shí)行。 |
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。 |
5.培養(yǎng)細(xì)胞:檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。 |
6.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。 |
7.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融. |
8.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。 |
大鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶 (ACE)ELISA試劑盒 |
操作步驟 |
1. 加樣:標(biāo)準(zhǔn)品設(shè)定5個(gè)濃度點(diǎn)10個(gè)孔,每個(gè)濃度設(shè)定平行孔,加入50微升不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,空白孔設(shè)定1個(gè)孔加入50微升蒸餾水(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔,在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。 |
2. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 |
3. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。 |
4. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。 |
5. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。 |
6. 溫育:操作同3。 |
7. 洗滌:操作同5。 |
8. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. |
9. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。 |
10. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。 |
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注意事項(xiàng): |
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 |
2. 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。 |
3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。 |
4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。 |
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 |
6. 底物請(qǐng)避光保存。 |
7. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn). |
8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。 |
9. 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。 |
11. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異,以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。 |
計(jì)算: |
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),根據(jù)樣品的OD |
值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo) |
準(zhǔn)曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋 |
倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。 |
試劑盒性能: |
1.樣品線(xiàn)性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990以上。 |
2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%和11% |
保存條件及有效期: |
1.試劑盒保存:2-8℃ |
2.有效期:6個(gè)月 |
大鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶 (ACE)ELISA試劑盒,專(zhuān)業(yè)實(shí)驗(yàn)代測(cè) |
大鼠促血管生成素2(ANG2)ELISA試劑盒 |
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