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上海信帆生物科技有限公司主營生物試劑和銷售--- | |||||||
人c-fos ELISA Kit | |||||||
此ELISA試劑盒的英文名稱是--- | |||||||
Human c-fos ELISA Kit | |||||||
規格: | 48T/96T | ||||||
我們的elisa試劑盒具有如下優點: | |||||||
一、高效、靈敏、特異的抗體; | |||||||
二、穩定的重復性和可靠性; | |||||||
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體; | |||||||
四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等等多種標本類型; | |||||||
五、性價比非常好,節省實驗經費。 | |||||||
ELISA是酶聯接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。自上世紀70年代初問世 以來,發展十分迅速,目前已被廣泛用 于生物學和醫學科學的許多領域。 | |||||||
人c-fos ELISA Kit | |||||||
Human c-fos ELISA Kit | |||||||
ELISA技術原理:以免疫學反應為基礎,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底 | |||||||
物的高效催化作用相結合起來 | |||||||
1. 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。 | |||||||
2. 結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性。 | |||||||
3. 酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。 | |||||||
4. 受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。再加入酶標記 的抗原或抗體,也通過反應而結合在固相載體上。 | |||||||
5. 此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。 | |||||||
6. 加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產物,產物的量 與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據呈色的深淺進行定 性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水 平),并且重復性好。 | |||||||
人c-fos ELISA Kit | |||||||
Human c-fos ELISA Kit | |||||||
我們采用的酶: | 辣根過氧化酶(HRP) | ||||||
1. HRP在蔬菜作物辣根中含量很高。 | |||||||
2. 是一種糖蛋白,含糖量約18%;分子量為44kD。 | |||||||
3. 是一種復合酶,由主酶(酶蛋白)和輔基(亞鐵血紅素)結合 而成的一種卟啉蛋白質。 | |||||||
4. 主酶為無色糖蛋白,在275nm波長處有zui高吸收峰;輔基是深 棕色的含鐵卟啉環,在403nm波長處有zui高吸收峰。 | |||||||
HRP催化下列反應: | |||||||
DH2+H2O2<==HRP==>D+2H2O | |||||||
上式中DH2為供氫體,H2O2為受氫體。HRP對受氫體的專一 性很高,除H2O2外,僅作用于小分子醇的過氧化物和尿素的過 氧化物。后者為固體,作為試劑較H2O2方便。許多化合物可作 為HRP的供氫體,在ELISA中常用的供氫體底物為鄰苯二胺(orthopenylenediamine,OPD)、四甲基聯苯胺(3,3', 5,5'-tetramethylbenzidine,TMB)和ABTS[2,2'-azino- bis(3-ethyl-benzthiazolinesulfonate-6)]。 | |||||||
人c-fos ELISA Kit | |||||||
Human c-fos ELISA Kit | |||||||
測定步驟 | |||||||
1.加樣 | |||||||
1. 除包被外都需45度加樣 | |||||||
2.加樣體積要準確 | |||||||
3.管底加樣,不能加在管壁上 | |||||||
4.加樣時不能產生氣泡 | |||||||
2.溫浴 | |||||||
1.加標本后和加結合物后,應立即放入按規定的反應溫 度的水浴箱。 | |||||||
2.各ELISA板不應疊在一起。 | |||||||
3.為避免蒸發,板上應加蓋,或將板平放在底部墊有濕 紗布的金屬濕盒中。 | |||||||
4.加入底物后,反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃,ELISA板可避光放在實驗臺上,以便 不時觀察,待對照管顯色適當時,即可終止酶反應。 | |||||||
3.洗滌 | |||||||
1.洗滌在ELISA過程中不是反應步驟,但卻 是決定實驗成敗的關鍵。 | |||||||
2.目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或 抗體結合的物質以及在反應過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質。 | |||||||
4.讀板 | |||||||
1.陰性對照顏色極淺,在定性測定中一般 可采用目視比色。 | |||||||
2.如用酶標儀測定結果,準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質 量和軟件的算法。 | |||||||
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