產(chǎn)品名稱: | 人高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒 |
產(chǎn)品英文名稱: | Human High mobility group protein B1,HMGB-1 ELISA Kit |
產(chǎn)品規(guī)格: | 48T/96T |
產(chǎn)品用途: | 科研實(shí)驗(yàn) |
保存條件: | 2-8℃ |
有效期: | 6個(gè)月 |
人高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒 |
組成 |
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶 |
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品(96μmol/L) 0.5ml×1 瓶 |
3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶 |
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說(shuō)明書 1 份 |
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張 |
6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè) |
標(biāo)本要求 |
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能 |
馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融 |
2.不能檢測(cè)含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。 |
人高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒 |
操作步驟 |
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀 |
釋。 |
48μmol/L 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
24μmol/L 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
12μmol/L 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
6μmol/L 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
3μmol/L 1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、 |
待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl, |
然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡 |
量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。 |
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。 |
4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用 |
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此 |
重復(fù)5 次,拍干。 |
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。 |
7. 溫育:操作同3。 |
8. 洗滌:操作同5。 |
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色 |
10 分鐘. |
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。 |
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止 |
液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 |
人高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒 |
計(jì)算 |
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的 |
OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計(jì)算出標(biāo) |
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù), |
即為樣品的實(shí)際濃度。 |
注意事項(xiàng) |
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未 |
用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 |
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。 |
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間 |
控制在5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。 |
4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD 值 |
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD 值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測(cè)定,計(jì) |
算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。 |
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 |
6.底物請(qǐng)避光保存。 |
7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn). |
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。 |
9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。 |
保存條件及有效期 |
1.試劑盒保存:;2-8℃。 |
2.有效期:6 個(gè)月 |
人高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒 |
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