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人解整合素樣金屬蛋白酶10(ADAM10)ELISA試劑盒,現(xiàn)貨供應,*,質(zhì)量保證。中英文雙版說明書,提供實驗代測服務。
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人解整合素樣金屬蛋白酶10(ADAM10)ELISA試劑盒實驗中的顯色和比色
(1) 顯色
顯色是ELISA中的zui后一步溫育反應,此時酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物。反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內(nèi),陰性孔可保持無色,而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當提高溫度有助于加速顯色進行。在定量測定中,加入底物后的反應溫度和時間應按規(guī)定力求準確。定性測定的顯色可在室溫進行,時間一般不需要嚴格控制,有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當縮短或延長反應時間,及時判斷。
OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應20-30分鐘后即不再加深,再延長反應時間,可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色,顯色反應應避光進行,顯色反應結(jié)束時加入終止液終止反應。OPD產(chǎn)物用硫酸終止后,顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色。 TMB受光照的影響不大,可在室溫中置于操作臺上,邊反應觀察結(jié)果。但為保證實驗結(jié)果的穩(wěn)定性,宜在規(guī)定的適當時間閱讀結(jié)果。TMB經(jīng)HRP作用后,約40分鐘顯色達,隨即逐漸減弱,至2小時后即可*消退至無色。TMB的終止液有多種,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反應終止。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間(12-24小時)不褪,是目視判斷的良好終止劑。此外,各類酸性終止液則會使藍色轉(zhuǎn)變成黃色,此時可用特定的波長(450nm)測讀吸光值。
人解整合素樣金屬蛋白酶10(ADAM10)ELISA試劑盒(2) 比色
比色前應先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體,然后將板正確放入酶標比色儀的比色架中。以軟板為載體的試驗,需先將板置于標準96孔的座架中,才可進行比色。在加底物液顯色前,先將軟板邊緣剪凈,這樣,此板就可*平妥坐入座架中。比色時應先以蒸餾水校零點,測讀底物孔(未經(jīng)任何反應僅加底物液的孔)和空白孔(以生理鹽水或稀釋液代替標本作全過程的孔),以記錄本次試驗的試劑狀況。其后可用空白孔以蒸餾水校零點,以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度,然后進行計算。比色結(jié)果的表達以往通用光密度(oplical density,OD),現(xiàn)按規(guī)定用吸光度(absorbence,A),兩者含義相同。通常的表示方法是,將吸收波長寫于A字母的右下角,如OPD的吸收波長為492nm,表示方法為"A492nm"或"OD492nm"。
(3) 酶標比色儀
酶標比色儀簡稱酶標儀,通常指于測讀ELISA結(jié)果吸光度的光度計。針對固相載體形式的不同,各有特制的適用于板、珠和小試管的設(shè)計。許多試劑公司配套供應酶標儀。酶標儀的主要性能指標有:測讀速度、讀數(shù)的準確性、重復性、精確度和可測范圍、線性等等。優(yōu)良的酶標儀的讀數(shù)一般可精確到0.001,準確性為±1%,重復性達0.5%。舉例說,若某孔測得的A值為1.083,則該孔相對于空氣的真實A值應為1.083±0.01(1.073~1.093),重復測定數(shù)次,其A值均應1.083±0.05(1.078~1.088)在之間。酶標儀的可測范圍視各酶標儀的性能而不同。普通的酶標儀在0.000~2.000,新型號的酶標儀上限拓寬達2.900,甚至更高。超出可測上限的A值常以"*"或"over"或其它符號表示。應注意可測范圍與線性范圍的不同,線性范圍常小于可測范圍,比如某一酶標儀的可測范圍為0.000~2.900,而其線性范圍僅0.000~2.000,這在定量ELISA中制作標準曲線時應予注意。 酶標儀不應安置在陽光或強光照射下,操作時室溫宜在15~30℃,使用前先預熱儀器15-30分鐘,測讀結(jié)果更穩(wěn)定。測讀A值時,要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰,如OPD用492nm波長。有的酶標儀可用雙波長式測讀,即每孔先后測讀兩次,*次在zui適波長(W1),第二次在不敏感波長(W2),兩次測定間不移動ELISA板的位置。例如OPD用492nm為W1,630nm為W2,zui終測得的A值為兩者之差(W1-W2)。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。各種酶標儀性能有所不同,使用中應詳細新聞記者說明書。
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