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非變性細胞/組織裂解液

非變性細胞/組織裂解液,內(nèi)含非離子型去垢劑,能裂解細胞并在非變性條件下釋放胞漿蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2024-10-06
  • 訪  問  量:815
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詳細介紹

非變性細胞/組織裂解液

產(chǎn)品名稱 非變性組織/細胞裂解液

產(chǎn)品規(guī)格】 100ml 

儲存條件 -20℃

有效期 12個月

產(chǎn)品簡介

非變性組織/細胞裂解緩沖液內(nèi)含非離子型去垢劑,能裂解細胞并在非變性條件下釋放胞漿蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。非變性條件下的裂解蛋白產(chǎn)物最大限度地保留了蛋白的特性和功能,如抗原-抗體結(jié)合或酶學活性,因此適宜于進行免疫共沉淀。另外,有些抗體對非變性蛋白具有更高的結(jié)合能力或只能識別非變性蛋白的抗原位點,這種情況應該使用非變性裂解。

 

本產(chǎn)品僅供科研實驗用,不做其它用途!

 

使用說明

根據(jù)使用量,取每 1ml 裂解液加入 10ul PMSF,使 PMSF 的最終濃度為 1mM?;靹騻溆茫≒MSF 現(xiàn)用現(xiàn)加)。

1、樣品前處理:

a)對于貼壁細胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔加入 150-250ul裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細胞充分接觸,冰上放置裂解 5-10 分鐘。

b)對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液,冰上放置裂解 5-10 分鐘。期間可以用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管,然后再裂解。

c)對于組織樣品:把組織-剪切成細小的碎片。按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量)  。  用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。

2、后處理:

充分裂解后,將裂解后的樣品 10000-14000g 離心3-5 分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的 PAGE、Western 和免疫沉淀、免疫共沉淀等操作。

注意事項

為取得最佳的使用效果,盡量避免過多的反復凍融??梢赃m當分裝后使用。裂解樣品的所有步驟都需在冰上或 4℃進行。裂解時間可根據(jù)實驗要求進行優(yōu)化處理。

非變性蛋白裂解液裂解得到的蛋白樣品,可以用 BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的 Triton X-100 等干擾物質(zhì),不能用 Bradford 法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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非變性細胞/組織裂解液

 

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