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葡聚糖凝膠 G 系列使用

更新時間:2021-01-19      瀏覽次數:742

上海信帆生物供應葡聚糖凝膠 G 系列產品,使用說明如下:

葡聚糖凝膠 G 系列使用說明

 

葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠,含有大量的羥基,很容易在水中和電解質溶液中溶脹。親水基質使其非特異性吸附小化,并在生物分子分離期間得到較高的回收率。G 型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯度,因此它們的溶脹度和分級分離范圍也有所不同。葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。

 

一:使用方法

Sephadex 系列產品以干粉形式存在,使用前必須溶脹,在膨脹期間應避免過度攪拌,因為它可能破壞填料,不要使用磁力攪拌器。

 

1、填料的準備

1)將填料在過量去離子水或緩沖液中,室溫條件下膨脹 24 小時,或用熱水膨脹 1 小時。洗脫緩沖液不應含有高粘度的試劑。溶脹過程中,如果上層有漂浮物,請去除。

2)將溶脹好的填料,所有的緩沖液等材料平衡至實驗操作溫度,對所有的緩沖液進行脫氣處理。

 

2、裝柱

1)檢查層析柱所有部件,特別是過濾網,密封圈,螺旋塞是否緊密,玻璃管是否干凈和完整。

2)將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位,務必使底端無氣泡。

3)用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內,注意勿使產生氣泡。打開柱子出液口,使凝膠在柱內自由沉降,連結好柱子頂端柱頭。

4)打開蠕動泵,讓緩沖液用使用時流速的 1.33 倍的流速流過,使柱床穩定(注意壓力不要超過填 料大耐壓)。

 

3、平衡

上樣前平衡層析柱至少 5-10 個柱體積直到記錄儀基線變得平穩為止(流出液的 pH 值和電導值等于 上柱的 Buffer pH 值和電導值)。

 

4、上樣

樣品一定要離心或過濾后(0.45um 濾膜)上樣。 凝膠過濾的上樣量一般為不大于 5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在 1-2%的柱床體積,視分 離情況可以調整;脫鹽時上樣量可以達到 20%的柱床體積,柱高的選擇也與分離要求相關,柱子越高,分 離效果相應越好,但是,柱高過高的凝膠柱會引起較大的反壓,也應當盡可能避免。難分離物質要有一定 柱高和流速控制,脫鹽時高徑比為 51 即可。

 

5、洗脫方法

可以用無鹽水,也可以采用上柱時的緩沖液洗脫。

 

6、在位清洗(CIP

凝膠使用十次后作一次 CIP,目的是去除柱床內沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是用 0.1 M 氫氧化 鈉洗 2 個柱體積,再以至少 10 個柱體積平衡緩沖液再生。

 

二:保存

未處理的填料,室溫密閉保存。使用完的填料,用純水將鹽分*沖洗,后保存在 20%乙醇中,4 保存。

 

三:注意事項:

1)上樣之前,樣品必須經過膜過濾及去除色素,否則雜質及色素會被吸附到填料上,影響填料的 正常使用。所有的緩沖液均需要用 0.45um 的過濾器過濾。

2)在使用過程中,避免使用高濃度的強酸強堿,酸和堿的濃度應低于 0.1 摩爾。堿會使流速變慢。

3)不同的樣品,吸附和洗脫方法不相同,可以根據相關的文獻進行。

 上海信帆生物供應葡聚糖凝膠 G 系列產品。

 

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