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植酸酶(phytase)試劑盒如何正確使用

更新時間:2020-12-18      瀏覽次數:872

植酸酶(phytase)試劑盒如何正確使用

上海信帆生物供應植酸酶(phytase)試劑盒,產品備有大量現貨,質量穩定,深受廣大科研用戶青睞。

植酸酶(phytase)試劑盒說明書

微量法100T/48S

注意:正式測定之前選擇2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義

植酸酶(phytase)是催化植酸及其鹽類水解為肌醇與磷酸(鹽)的一類酶的總稱,屬磷酸

單酯水解酶,它能將食品和飼料中植酸及其鹽轉化為可供有機體利用的有效磷,降低糞便中

的磷含量,減輕對環境的污染,改善營養成分的吸收和利用,因此具有極其廣泛的研究和應

用價值。

測定原理

植酸酶在一定溫度和pH 值條件下,水解底物植酸鈉生成無機磷與肌醇衍生物,無機磷在酸

性環境中與鉬酸銨顯色劑反應生成藍色復合物,在700nm 處有特征吸收峰,根據700nm 處

吸光值變化可計算得植酸酶活性。

自備實驗用品及儀器

天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水浴鍋,超聲

溶解器,回旋式振蕩器。

試劑組成和配制

提取液:液體100mL×1 瓶,4℃保存。

緩沖液:液體15mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:粉劑×1 支,4℃保存,臨用前加緩沖液6mL 配制,現用現配;用不完的試劑4℃

保存一個月。

試劑二:液體15mL×1 瓶,4℃保存。

顯色劑:粉劑×8 瓶,4℃保存,臨用前根據用量每瓶加0.4mL 雙蒸水溶解,再加1.6mL 試

劑二混勻。

樣本處理

1. 酶制劑:按照質量(g):提取液體積(mL)為1:500~1000 的比例(建議稱取約0.001g,

加入1mL 提取液)加入提取液,在超聲波溶解器上溶解15min,再用回旋式振蕩器振蕩

15min,待測。

2. 組織:按照質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10 的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL

提取液)進行冰浴勻漿,在超聲波溶解器上溶解15min,再用回旋式振蕩器振蕩15min,

4℃,4000g 離心10min,取上清待測。

3. 飼料樣品:飼料烘干粉碎,過40 目篩,按照質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10 的

比例(建議稱取約0.1g,加入1mL 提取液)進行冰浴勻漿,在超聲波溶解器上溶解15min,

再用回旋式振蕩器振蕩15min,4℃,4000g 離心10min,取上清待測。

4. 培養液等液體樣品,混勻直接測定。

測定操作表

對照管 測定管

樣本(μL) 30 30

37℃溫育5min

緩沖液(μL) 120

試劑一(μL) 120

混勻,37℃溫育30min

95℃,10min 終止反應,冷卻至室溫

顯色劑(μL) 150 150

混勻,37℃靜置15min,10000g,室溫,離心5min,取上清200μL,

測定700nm 處吸光值,△A=A 測定管-A 對照管。每個測定管設一個

對照管。

酶活性計算公式

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線:y = 0.2764x + 0.0082,R2 = 0.9998;x 為標準品濃度(μmol/mL),y 為吸光值。

1. 按照蛋白濃度計算

酶活性定義:在37℃,pH5.5 的條件下,每毫克蛋白每分鐘從5mmol/L 的植酸鈉溶液中

釋放出1μmol 的無機磷為一個酶活力單位。

植酸酶活性(μmol/min/mg prot)=(△ A-0.0082)÷0.2764÷Cpr÷T =0.1206×(△ A-0.0082)

÷Cpr2.按照樣本質量計算

酶活性定義:在37℃,pH5.5 的條件下,每克樣本每分鐘從5mmol/L 的植酸鈉溶液中釋

放出1μmol 的無機磷為一個酶活力單位。

植酸酶活性(μmol/min /g 鮮重)=(△ A-0.0082)÷0.2764÷W÷T =0.1206×(△ A-0.0082)÷W

3. 培養液等液體樣品

酶活性定義:在37℃,pH5.5 的條件下,每毫升液體每分鐘從5mmol/L 的植酸鈉溶液中

釋放出1μmol 的無機磷為一個酶活力單位。

植酸酶活性(μmol/min /mL)=(△ A-0.0082)÷0.2764÷T =0.1206×(△ A-0.0082)

Cpr:樣本蛋白含量,mg/mL;W:樣本質量,g;T:反應時間,30min。

b. 用96 孔板測定的計算公式如下

標準曲線:y = 0.1382x + 0.0082,R2 = 0.9998;x 為標準品濃度(μmol/mL),y 為吸光值。

1.按照蛋白濃度計算

酶活性定義:在37℃,pH5.5 的條件下,每毫克蛋白每分鐘從5mmol/L 的植酸鈉溶液中

釋放出1μmol 的無機磷為一個酶活力單位。

植酸酶活性(μmol/min/mg prot)=(△ A-0.0082)÷0.1382÷Cpr÷T = 0.2412×(△ A-0.0082)÷Cpr

2.按照樣本質量計算

酶活性定義:在37℃,pH5.5 的條件下,每克樣本每分鐘從5mmol/L 的植酸鈉溶液中釋

放出1μmol 的無機磷為一個酶活力單位。

植酸酶活性(μmol/min /g 鮮重)=(△ A-0.0082)÷0.1382÷W÷T =0.2412×(△ A-0.0082)÷W

3. 培養液等液體樣品

酶活性定義:在37℃,pH5.5 的條件下,每毫升液體每分鐘從5mmol/L 的植酸鈉溶液中

釋放出1μmol 的無機磷為一個酶活力單位。

植酸酶活性(μmol/min /mL)=(△ A-0.0082)÷0.1382÷T =0.2412×(△ A-0.0082)

Cpr:樣本蛋白含量,mg/mL;W:樣本質量,g;T:反應時間,30min。

注意事項

1、顯色劑需要臨用前根據用量配制,每一瓶是13 個樣本的用量,新配制的顯色劑若有顏色

則已經污染或者試劑過期,應放棄使用。

2、ΔA 線性范圍為0.01-1。

植酸酶(phytase)試劑盒如何正確使用

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