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產品分類補體現貨,凍干補體應該如何正確使用
使用方法:每支加0.5ml蒸餾水復溶,靜置10分鐘后輕輕搖勻;滴定時用緩沖生理鹽水或緩沖液(不能含NaN3)做1:5-10倍稀釋使用,臨用現配。
穩定性:4-8℃保存3年(暗處保存)
用途:總補體溶血活性(CH50)檢測使用
產品規格:0.5ml/支*10
注意事項:請穿戴實驗服及一次性手套操作。
血清總補體溶血活性(CH50)測定方法一、原理利用綿羊細胞與相應抗體(溶血素)結合成的復合物,可激活血清中的補體,導致紅細胞溶解,當紅細胞和溶血素量一定時,在規定反應的時間內,溶血程度與補體量及活性呈正相關。在接近50%溶血(CH50)時,二者之間近似直線關系,故以50%溶血作為敏感的判斷終點。以引起50%溶血所需的小補體量為一個CH50U,可計算出待測血清中總的補體溶血活性,以CH50U/ml表示。
本實驗主要反映補體經典活化途徑的溶血功能,其結果與補體C1~C9各組成分的量及活性均有關。
二、試劑及配制
1.緩沖生理鹽水:(1)貯存液:Na2HPO4.12H2O2.85gKH2PO40.27gNaCl17.00g蒸餾水定容至100ml4℃保存備用(2)應用液:5ml貯存液加95ml蒸餾水,再加10%硫酸鎂0.1ml,當日配制,12小時內使用。
2.2%綿羊紅細胞:無菌采取綿羊血液,于等量Alsever液中可保存3周。用前以緩沖液洗3次,并配成2%細胞懸液。必要時可用吸光光度法或細胞計數法使懸液細胞濃度標準化。
3.溶血素:將綿羊紅細胞溶血素(效價1:4000),用應用液做1:2000倍稀釋(即1ml溶血素加1999ml應用液)。
4.待測血清:新鮮血液室溫放置30min,再4℃放置60min,使血收縮,4℃離心(3000r/min)10min,取上清,-20℃保存。
三、操作步驟試管法(改良Mayer法)
1.致敏羊紅細胞:2%綿羊紅細胞加等量稀釋后的溶血素(1:2000),混勻,置37℃水浴30min。
2.稀釋血清:待測血清0.2ml,加應用液3.8ml,稀釋度為1:20。
3.配制溶血標準管:全溶血管:2%綿羊紅細胞2ml加8ml蒸餾水,混勻。50%溶血管:取全溶血管液2ml加緩沖液2ml。
4.按表所示,依次加各成分于試管中,混勻,置37℃水浴30min,第10管為非溶血對照:補體CH50測定試管法
5.結果測定:取出試管,2000r/min離心10min,對照管應不溶血。肉眼比色,選與50%溶血標準管相近二管,再用分光光度計測(波長542nm、0.5cm比色杯)OD值,確定與標準管接近者為終點管,然后按下公式計算CH50值:血清補體CH50(U/ml)=(1/血清用量)×稀釋度。如第5管為終點管,測待測血清中CH50為66.7U/ml。血清補體CH50正常值為50-100U/ml。
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