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小鼠核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)試劑盒真的太棒了

更新時間:2018-01-29      瀏覽次數:1011

小鼠核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)試劑盒真的太棒了

檢測目的

本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65) 含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65) 水平。用純化的小鼠核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65) 抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65) ,再與HRP標記的核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65) 抗 體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65) 呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標 準曲線計算樣品中小鼠核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65) 濃度。

第五部分 操作步驟

  • 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

600pg/ml

5 號標準品

150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液

300pg/ml

4 號標準品

150µl  5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

150pg/ml

3 號標準品

150µl  4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

75pg/ml

2 號標準品

150µl  3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

37.5pg/ml

1 號標準品

150µl  2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

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  • 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl, 然后再加待測樣品 10µl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡 量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
  • 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
  • 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
  • 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此

 重復 5 次,拍干。

  • 加酶:每孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。
  • 溫育:操作同 3
  • 洗滌:操作同 5
  • 顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

     10 分鐘.

  • 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

測定:以空白調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內進行。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未 用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間 控制在 5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

4 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD  大于標準品孔*孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,計 算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

5 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

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