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Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF預(yù)裝柱的使用說(shuō)明

更新時(shí)間:2022-12-20      瀏覽次數(shù):1424

Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF預(yù)裝柱的使用說(shuō)明


Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FFStrep-Tactin Berpharose FF

1.      產(chǎn)品介紹

Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF是一種將Strep-Tactin鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的生物親和層析分離介質(zhì),主要用于純化Strep II標(biāo)簽蛋白。Strep II標(biāo)簽為8個(gè)氨基酸的小標(biāo)簽(WSHPQFEK),由于標(biāo)簽小,僅為1kDa左右,一般不影響融合后蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能,常用于融合表達(dá)蛋白質(zhì)的檢測(cè)和純化。

本產(chǎn)品的配基Strep-Tactin是鏈霉親和素(Streptavidin)的突變體,與鏈霉親和素相比,Strep-Tactin對(duì)Strep II標(biāo)簽的親和能力至少?gòu)?qiáng)10倍以上,能夠在溫和的條件下與Strep II融合蛋白結(jié)合和解離。由于Strep-Tacin對(duì)Strep II標(biāo)簽具有高度特異性,一般一步純化就能獲得高純度的蛋白質(zhì)樣品。

Strep II標(biāo)簽蛋白與凝膠結(jié)合后可使用脫硫生物素競(jìng)爭(zhēng)方式進(jìn)行洗脫,該洗脫方式比較溫和,一般不會(huì)影響蛋白質(zhì)的性質(zhì)。如蛋白質(zhì)能耐受一定的堿,也可用堿液洗脫,比如10mM NaOH等。Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF能耐受較高的堿清洗,可以用0.5M NaOH進(jìn)行再生清洗和去除熱源等。另外,2-(4-羥基苯唑)苯甲酸(HABA)也可用于凝膠再生,過(guò)量的HABA能夠競(jìng)爭(zhēng)下脫硫生物素,并且在無(wú)HABA的緩沖液中,能將凝膠上的HABA洗脫。

2.規(guī)格

1ml(預(yù)裝柱)、5ml(預(yù)裝柱)、10ml(預(yù)裝柱)、20ml、100ml500ml

3.產(chǎn)品性能

性能

指標(biāo)

基質(zhì)

6%瓊脂糖微球

配基

Strep-Tactin

配基密度

5mg/ml

載量

6mg/ml Strep II標(biāo)簽蛋白

粒徑

45-165μm

推薦流速/*大流速

20-100/700 cm/h

耐反壓

0.3MPa

pH穩(wěn)定范圍:短時(shí)間/長(zhǎng)時(shí)間

2~13/4~11

儲(chǔ)存緩沖液

20%乙醇

儲(chǔ)存溫度

4-8

 

4.純化流程

①推薦緩沖液

純化Strep II標(biāo)簽蛋白

結(jié)合緩沖液:100mM Tris-HCl,150mM NaCl1mM EDTApH8.0;

20mM NaH2PO4280mM NaCl,6mM KCl,pH7.4

洗脫緩沖液:結(jié)合緩沖液+ 2.5mM脫硫生物素;

10mM NaOH

再生緩沖液:0.5M NaOH;

或結(jié)合緩沖液+1mM HABA

②樣品準(zhǔn)備

上柱的樣品應(yīng)盡量保持與結(jié)合緩沖液一致。通??捎猛肝?、超濾、稀釋等方法處

理樣品。并且上柱前應(yīng)過(guò)0.45μm濾膜或高速離心去除不溶物。

③樣品純化

1)平衡:取適量的Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF裝入合適的層析柱中,用蒸餾

水清洗5個(gè)柱體積去除保存液,再用結(jié)合緩沖液平衡5個(gè)柱體積,建議流速為100cm/h

2)上樣:將準(zhǔn)備好的樣品上柱,建議流速為20-100cm/h,可根據(jù)實(shí)際結(jié)合情

況選擇流速,能獲得較好的效果。

3)再平衡:上樣后用結(jié)合緩沖液平衡10個(gè)柱體積以上,或平衡至基線,洗去

雜質(zhì),推薦流速為100cm/h

4)洗脫:用洗脫緩沖液洗10-20個(gè)柱體積,建議流速為100cm/h,收集的洗脫

液應(yīng)立即調(diào)節(jié)pH至穩(wěn)定范圍,并根據(jù)需要置換緩沖液。

5NaOH再生:洗脫目的蛋白后的柱子用蒸餾水清洗3-5個(gè)柱體積,并用0.5M

NaOH再生3-5個(gè)柱體積,再用蒸餾水清洗至中性,用20%乙醇保存柱子,或進(jìn)行下

一次純化。

6HABA再生:用脫硫生物素洗脫目的蛋白的,還可以用HABA緩沖液再生,

一般用HABA的結(jié)合緩沖液洗15個(gè)柱體積,再用結(jié)合緩沖液洗30個(gè)柱體積,然后可

以用20%乙醇保存柱子,或進(jìn)行下一步純化。HABA上柱后凝膠顏色會(huì)變?yōu)榧t橙色,

在結(jié)合緩沖液平衡后會(huì)恢復(fù)正常的白色,這種再生方式一般使用體積會(huì)大些。

 

5.注意事項(xiàng):

1)使用時(shí)保證柱子和緩沖液的溫度一致,避免柱床內(nèi)產(chǎn)生氣泡,影響純化效果。

2)本產(chǎn)品保存條件為20%乙醇,4~8℃。

3) 2-25,常壓,避光運(yùn)輸

4)僅供科研實(shí)驗(yàn)使用

 

Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF預(yù)裝柱的使用說(shuō)明

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