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組織樣本中的甘油含量如何檢測更精確

更新時間:2022-03-15      瀏覽次數(shù):981

 組織樣本中的甘油含量如何檢測更精確


上海信帆生物供應(yīng)組織樣本甘油檢測試劑盒,下面我們來看看如何測定組織樣本,才能更加精確!


首先我們來看一下:樣本應(yīng)該如何處理?

組織細胞裂解

細胞(包括分化的脂肪細胞)裂解: 消化、離心收集細胞。或直接在培養(yǎng)皿內(nèi)裂解。通常6孔板單孔約2x106個細胞,75cm2瓶約1x107細胞。按比例每 1~2 x 106細胞加 0.1ml 裂解液,混勻,靜置 10 分鐘。


動物組織裂解:

切記要預(yù)先將新鮮組織剪切稱重后再進行保存。組織凍存后再進行解凍、剪切、稱重可能會產(chǎn)生嚴重的測量誤差。離心管精確稱重,加入組織塊后再稱重,二者相減(即減量稱重法)計算組織量(約 100mg)。強烈建議按比例每 1mg 組織加10µl裂解液以減少樣品間蛋白和脂質(zhì)含量變異而產(chǎn)生的誤差。(注意;裂解液用量在 1ml 或更多可保證有效的裂解與脂質(zhì)提取)。用電動高速勻漿器或手動玻璃勻漿器破碎組織。(不推薦超聲方法,因其不能*和均勻破碎。應(yīng)根據(jù)預(yù)實驗調(diào)整初始的組織細胞加入量),而后,靜置 10 分鐘。

 

二. 裂解液處理:

1. 取適量上清液轉(zhuǎn)移到 1.5ml 離心管中,進行步驟

2 的操作。余下的裂解液可用 BCA 法蛋白定量試劑盒進行蛋白定量或-20oC 儲存。

2. 70oC 加熱 10 分鐘滅活脂肪酶,可能出現(xiàn)絮狀沉淀。

3. 室溫 5000rpm 離心 5 分鐘,上層清液即可用于酶學(xué)測定。



注意:當(dāng)甘油濃度較低時,可將待測樣品與工作溶液按照100µl:100µl體積混合,然后再進行測定,但是如果樣品體積超過100µl時將會稀釋工作液中酶的濃度,使反應(yīng)靈敏度下降。如果待測樣品濃度超過線性范圍,可進行適當(dāng)稀釋,然后根據(jù)稀釋倍數(shù)來計算樣品中甘油濃度。)


 組織樣本中的甘油含量如何檢測更精確

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