PRODUCT CLASSIFICATION
產品分類信帆生物專業提供β-淀粉酶,產品質量穩定,*,確保銷售給客戶的產品是能夠符合質量標準,適合客戶要求的產品。本產品*,歡迎新老客戶前來咨詢訂購.
測定意義:
淀粉酶負責水解淀粉,主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)可隨機地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵,生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖。
測定原理:
還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質。α-淀粉酶不耐酸,β-淀粉酶不耐熱。根據上述特性,鈍化其中之一,就可測出另一種淀粉酶的活力。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、恒溫水浴鍋、離心機、可調式移液器、玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:50mL×1瓶,常溫保存,若有黃色晶體析出,需加熱溶解后再用;
試劑二:40mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
稱取約0.1g樣本,加入0.8mL蒸餾水,研磨勻漿;將勻漿倒入離心管中,提取液在室溫下放置提取15min,每5min振蕩1次,使其充分提取;3000g,常溫離心10min,取上清液加蒸餾水定容至10 mL,搖勻,即淀粉酶原液。
吸取上述淀粉酶原液1mL,加入4mL雙蒸水,搖勻,即為淀粉酶稀釋液,用于(α+β)淀粉酶總活力的測定。
測定步驟和操作表:
試劑名稱(μL) | α?淀粉酶活力測定 | 總淀粉酶活力測定 | ||
對照管 | 測定管 | 對照管 | 測定管 | |
淀粉酶原液 | 250 | 250 |
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|
70℃水浴15min左右,冷卻
淀粉酶稀釋液 |
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| 250 | 250 |
試劑一 | 500 |
| 500 |
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將以上對照管、測定管和試劑二置于40℃恒溫水浴中保溫10min左右
試劑二 | 250 | 250 | 250 | 250 |
在40℃恒溫水浴中準確保溫5min
試劑一 |
| 500 |
| 500 |
混勻,室溫靜置10min,在540nm下測定吸光度,從左到右分別記為A1、A2、A3和A4。
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